蛋白免疫产品技术咨询FAQ

可能是目的蛋白未表达；建议优化实验方案，确保目的蛋白表达。

由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。

由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。

可能是融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力；建议更换载体。

可能是平衡/洗杂不充分；建议加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA 等。

可能是样品pH 值不在内毒素结合范围内；建议用 0.1MNaOH 或 0.1M HCl 调节至 pH7-8。

树脂纯化过其他样品；不用使用过的树脂去除不同样品内毒素。

可能是样品非特异性吸附在树脂上；建议增加样品和平衡液的NaCl 浓度。

20%DMSO，20%乙醇，20%甘油；1M 尿素，300mM 咪唑；0.05% Tween 20， 10mM DTT 等

可根据填料的内毒素载量，可检测自己样品中的内毒素含量确定；如果实在无条件检测自己样品中的内毒素的含量，初次实验可按照填料：样品体积比=1：1或1：2上样

酸碱交替清洗去除偶联不牢的组分以减少后续纯化时配体脱落。

看您的抗原稳定性吧，您抗原是蛋白还是多肽,一般可以用接近10次左右。用几次之后不结合抗体了说明不能用了。

2）抗原上的巯基位点有没有数量限制？1）TCEP这个测试过已经是完全过量可以还原蛋白。如需调整TECP用量可以做几个浓度梯度对比还原后巯基的数量。2）没有限制。

1.5mg左右

结合生物素化BSA载量约4mg/ml介质。

减少杂质以防阻塞柱子。

最好不要，可轻轻搅拌填料或者敲打层析柱以排除气泡。

由于盐酸胍的带电性强，会中和 SDS 的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS 作为透析液，透析两次，每次 1 小时，透析液的体积可控制在样本的 100 倍）。

一般用 2 倍柱体积的 0.1 M NaOH 或 6 M 盐酸胍或 8 M 尿素溶液进行清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS，pH 7.4 清洗，来去除一些沉淀或变形物质；用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积 1% Triton X-100 清洗，然后立即用 5 倍柱体积的 PBS…

主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来。纯化亚氨基生物素标签蛋白可以在非变性的条件下洗脱。