咪唑特别适用于 pH 6.2-7.8 范围内的缓冲液。
蛋白纯化FAQ
用于洗脱含多聚组氨酸的蛋白或多肽。
溶于水。一般用于his标签蛋白纯化的洗脱试剂，建议按纯化介质说明书现配现用。
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；判断是样品本身表达的问题，还是未结合或未洗脱下来。
样品中含有其他 His 标签蛋白：通过调节 pH 值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段（如去离子交换，疏水等）进一步纯化洗脱组分。
镍离子脱落或者剥离，按照填料再生的操作重新挂镍离子。
指的是填料的体积，不包括保护液的。
1.柱子在清洗平衡步骤流速减慢，柱子下筛板堵塞或者是试剂中有杂质堵塞。2.上样过程中流速逐渐降低，样品中有不溶物 堵塞填料或者是样品粘稠。少数情况蛋白挂柱后 流速也会减慢。 3.洗杂洗脱步骤流速减慢，蛋白不稳定 在柱子上沉淀，可以选择低温条件纯化，或者是在整个纯化过程中样品试剂中加入甘油保护蛋白。
指的是5-10倍的填料体积。
缓冲液中含有DTT 等还原剂，适当降低还原剂 DTT 的浓度，或改用巯基乙醇。
可能是蛋白不稳定析出，建议在可4度下进行上样或样品中加入少量甘油。
可能是洗杂不彻底：建议增加Wash Buffer 体积；
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；若是目的蛋白结合比较弱，可以降低裂解液中的咪唑浓度，调PH到8。
含 20%乙醇的 1×PBS。
>40 mg 6×His-tagged protein/mL 基质。
不能。建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经 0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤后上柱使用。
这个没有统一标准，具体浓度需要自己在实验中探索。
可以先跑胶鉴定下样品、流穿和洗脱；若是本身样品中表达量太低，建议优化表达条件，使用包涵体纯化缓冲体系。
是的，是从牛血中提取的。
纤维蛋白原冻干粉组分表（100mg）纤维蛋白原：66mg甘露醇：12mg三羟甲基氨基甲烷：6mg氯化钠：16mg