可高效地把 SUMO 从融合蛋白上切割下来。
蛋白纯化FAQ
SUMO 蛋白酶还具有多聚 His 标签,便于使用亲和层析的方法,去除SUMO 蛋白酶,纯化目的蛋白。
来源于大肠杆菌,经SDS-PAGE 及HPLC 分析得到,纯度> 90%。
25 mM Tris-HCl, pH 8.0、0.1% Igepal (NP-40)、250 mM NaCl、500 μM DTT、50% 甘油。
IdeS 可识别人源和其他多种动物来源的IgG,可作为工具酶应用于抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析。
不能,-20℃保存。
一般要根据具体实验做预实验,自己摸索。
推荐反应缓冲是 50 mM 磷酸钠,150 mM NaCl(pH6.6),多数常见的生物缓冲也适用,比如 Tris 或 PBS。但推荐反应缓冲是 50 mM 磷酸钠,150 mM NaC(l多数常见的生物缓冲也适用,比如 Tris 或PBS。pH6.6),
该酶的分子量是110KDa.
该酶储存液的配方是PBS PH 7.4,50% glycerin。
本品是从牛的血浆纯化制得,具有纯度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、灭活病毒、生产稳定性好等特点。
我们的凝血酶没有每毫克干粉的活性指标,说明书的的比活度指的是产品中每毫克蛋白质含有的凝血酶活性。
建议凝血酶母液用生理盐水配制,切割时的缓冲液最好加入0.9%的氯化钠,可以在4℃切割24小时。建议加入等量的消化缓冲液(推荐20mM Tris-HCl缓冲液,含150mM 氯化钠,pH8.0)
如果在4℃切割不明显,可以尝试在37℃进行切割实验,每2小时补加适量的凝血酶,看看是否能有效切割。
用我们实验室的融合蛋白,每1mg融合蛋白加凝血酶5U,反应缓冲体系为20mM Tris-HCl 含0.15M 氯化钠,pH7.8,比较37℃和4℃的切割效果,反应时间4小时,两种温度条件下均可实现基本完全切割,在1小时和2小时,37℃切割效果明显较4℃好。4小时后两者差别不明显。
我们的凝血酶每1 KU中约含有凝血酶蛋白质0.5 mg,凝血酶1KU每支中干粉质量约30 mg,大部分为辅料。
一般建议一次用完。凝血酶产品为冻干粉末,溶解时,建议每支凝血酶加0.9%氯化钠溶液1~2 ml复溶,制成浓溶液,该浓溶液在-20℃以下保存,6个月内活性变化不显著,但应避免反复冻融。临用前,再用工作液稀释至终浓度。一般应避免使用纯水溶解和稀释,在纯水中凝血酶容易发生变性失活。
一般磷酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液都是可以的。
产品在常温下放置一周以内影响不大。
凝血酶可从切割产物中用苯甲脒或肝素琼脂糖亲和纯化移去。