可能是样品或buffer 中有气泡;建议样品和 buffer 进行脱气。
可能是柱子太脏,载量降低;建议清洗树脂。
一般填料的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为:20ul填料+5ug抗体与总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。
用于偶连抗体进行蛋白的IP和coip不建议重复使用。
答:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。
答:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。
工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。
85%以上。
蛋白样品一般会被稀释1-1.5倍。
同一种蛋白的脱盐是可以重复使用的,一次样品脱盐结束后使用平衡缓冲液冲洗5-10CV可以进行第二个样品的脱盐.
重复次数与样品和使用有关。如果用10 mM NaOH CIP,接触时间3 min左右,可再生10~15次,载量可以保持在初始值80%及以上;如果用50 mM NaOH CIP,接触时间3 min左右,可再生3~5次,载量可以保持在初始值80%及以上。50 mM NaOH 接触时间过长可能导致填料失去…
13.3KD。
生物素在碱性环境下能增加溶解度,平衡液溶解后可以检测下pH值(我们之前发现在平衡液中加入高浓度生物素后,pH值可能会到6左右,这个环境肯定是难溶的),把溶液的pH值调回8(碱性)就可以溶解了。
可以,不推荐5ml预装柱连接超过3个,多个串联会影响脱盐效果的。
不能,SDS一般是和蛋白质结合在一起的。可以去除蛋白溶液里的EDTA和游离的金属离子。