10298ES、10299ES和10301ES均为翌圣生物的DNA连接酶产品,具体区别如下:(1)10298ES:灵敏度更高,尤其适用于cfDNA(循环肿瘤DNA)样本的建库,可有效应对低起始模板量的连接需求;(2)10299ES:酶连接效率高,且宿主大肠杆菌残留低,尤其适合病原检测、NIPT(无创…
高通量测序产品技术咨询FAQ
10298、10299产品可用于分子克隆。使用时,可将酶稀释至常规用于克隆的T4 DNA Ligase浓度,再按照产品说明书的操作流程进行。稀释可直接使用产品内提供的buffer
连接反应中,若连接 buffer 未充分混匀,可能导致酶与底物混合不均,进而影响连接效率,最终造成文库产量降低。为确保反应体系混合均匀,建议采用以下操作:(1)将反应管上下颠倒 10 次;(2)或使用漩涡混合仪短暂涡旋 3 秒。
Canace 暂不建议直接用于酵母菌液。若需尝试使用,需对酵母菌进行破壁处理,具体方法包括:(1)通过煮沸处理;(2)进行反复冻融操作;(3)添加蜗牛酶等酶制剂辅助破壁后,再尝试使用 Canace。
Canace 对模板长度的理论验证范围为:简单模板支持 20 kb,复杂模板支持 10 kb。在此范围内,理论上可用于相应长度片段的扩增。但具体扩增效果还与模板质量、引物设计及反应条件等因素相关,建议根据实际实验体系进行优化。
Canace 暂未针对多重PCR进行验证。若需开展多重PCR实验,建议选用Cat#13606ES产品。
Canace 可应用于以下场景:(1)平末端克隆:适用于对平末端 DNA 片段进行连接,构建重组载体;(2)点突变:支持定点突变实验,实现 DNA 序列的精准修饰;(3)高保真性 PCR:在 PCR 扩增过程中保持高保真度,确保扩增产物序列的准确性。
a)Canace 具有保真性的原理是其具备 3’-5’核酸外切酶活性,可对新合成的 DNA 链进行校正,从而降低突变率。b)关于错配率:Taq 酶的错配率约为 2×10⁻⁴(即 0.0002),意味着在扩增约 5kb 片段时,大约会有 1 个碱基发生突变;而 Canace 的错配率约为 0.0003…
Canace 高保真酶目前暂不具备热启动特性。如需热启动高保真酶产品可以选择Cat#10153ES。
Canace 扩增产物是平末端。原因是 Canace 高保真酶具备 3’-5’核酸外切酶活性,会将扩增产物 3’端的 A 进行切除,从而使产物末端呈现平末端特征。
若使用Canace扩增后获得平末端产物,需加A尾时,可按以下步骤操作:(1)首先对平末端PCR产物进行纯化,要求产物浓度至少为20ng/μL(可通过琼脂糖凝胶电泳观察条带清晰度及亮度判断,或通过Nanodrop和Qubit定量)。(2)取14.5μL PCR产物,加入2μL Taq Buffer、3…
关于其他品牌高保真酶产品能否用Canace替代,需根据具体酶的特性及实验需求综合判断。本公司的Canace系列高保真酶在序列保真度、扩增效率等核心性能上具有优势,可替代部分品牌的高保真酶产品。但不同品牌酶在具体参数(如最佳反应温度、Mg²⁺浓度、扩增片段长度上限等)上可能存在差异,建议在使用前参考产…
针对12199ES、12200ES、12201ES建库试剂盒,接头搭配选择如下:(1)完整接头(Cat#12615-12618):适用于单端建库,支持48个index;若客户需更多index,可咨询技术支持。(2)单端短接头(Cat#12611-12612):适用于单端建库,支持96个index。(…
12197与12199均为机械法DNA建库相关产品,二者的主要区别在于建库起始量不同:(1)12197建库起始量为100pg - 1μg;(2)12199建库起始量为500pg - 1μg。
本一步法建库试剂盒具有以下优势:(1)引入高质量片段化酶,无需复杂的片段化过程,可实现稳定的片段化效果;(2)搭配强扩增效率的高保真酶,能极大提升文库转化效率与扩增效率;(3)针对不同GC 含量的样本,均可获得优异的测序结果,文库覆盖度高、均一性好,、偏好性低,使建库过程更加简便。
华大智造(MGI)的建库接头主要有两种编号体系:1-128 及 501-596。关于接头的具体使用要求,建议您参考华大智造官方发布的“Adapter 使用说明”文档;若有进一步疑问,可咨询本公司技术支持。此外,华大智造明确声明:由于两种接头的设计工艺存在差异,禁止混用,否则可能导致测序数据无法正常拆…
13341ES是用于单端Barcode文库环化的试剂。若文库为双端Barcode,可选用13340ES进行文库环化操作。
13577ES与12197ES的主要区别在于适用场景:13577ES更适合FFPE样本的机械法建库、cfDNA样本的直接建库及NIPT领域的血浆样本建库,且支持PCR-Free文库构建。
12901ES 为 T4 DNA 聚合酶与 DNA 聚合酶 I 存在以下差异:(1)酶活性差异:该酶具有 5'→3' DNA 聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性,且活性均高于 DNA 聚合酶 I;(2)5'→3' 核酸外切酶活性缺失:T4 DNA 聚合酶不具备 5´'→3´' 核酸外切酶活性,…
12903(末端修复酶)具有以下酶活性:(1)5'-3'外切酶活性;(2)5'-3'聚合酶活性;(3)3'-5'外切酶活性)。