接头连接后**不可以直接进行分选**。原因是连接反应体系中含有的Ligation Enhancer（连接增强剂）内含高浓度PEG（聚乙二醇），PEG会对后续的分选过程造成显著干扰。因此，接头连接后若需进行片段分选，必须先通过纯化步骤（如使用磁珠法、柱纯化或乙醇沉淀等方法）去除Ligation Enh…
高通量测序产品技术咨询FAQ
FFPE样本修复试剂可针对石蜡样本的切口、缺刻及末端氧化情况进行有效修复。对文库构建的影响主要体现在：（1）可提升文库产量；（2）对测序质量（如Coverage等指标）无明显影响。需注意，该修复试剂的修复过程存在额外引入突变的可能性，因此肿瘤等样本的客户不建议使用。
文库片段大小分布通常受二代测序技术的读长限制、测序需求、仪器型号及测序模式（单端或双端测序）等因素影响，一般在 200-800 bp 范围内。
包含mRNA capture beads。但不包含DNA 纯化磁珠。
使用13488试剂盒合成双链cDNA后，若搭配本公司的Cat#12316ES建库试剂盒，可直接进行酶切反应构建文库，无需磁珠纯化；若搭配其他品牌建库试剂盒，建议先使用磁珠纯化双链cDNA后再进行后续建库操作。
1. RNA投入量：本产品适用于Total RNA 500 pg - 1 μg的投入量。2. 投入的RNA类型：可投入总RNA（Total RNA）。3. 引物替换建议：不建议将随机引物替换为oligo dT引物，可能会导致产量降低。若需使用oligo dT引物，需先分离mRNA后再进行逆转录反应。
可以。13488包含逆转录反应和cDNA第二链合成步骤，适用于后续的多重扩增子建库流程。
不可以。12603ES试剂盒的设计用途为从总RNA中分离mRNA，若直接使用其从组织裂解液中分离mRNA，裂解液中的组分及杂质可能会对mRNA的分离效果产生干扰。建议先按照标准流程对组织裂解液进行预处理（如去除基因组DNA、沉淀蛋白等），或选择适用于直接从裂解液中分离RNA的试剂盒。
mRNA占总RNA的比例通常为1%~5%（具体比例因样本类型而异）。若mRNA得率偏低，建议优先检查RNA是否发生降解。操作前，需使用RNase清除剂对实验台面进行清洁；操作过程中，应全程使用无酶耗材，并勤换手套，以避免RNase 污染。
12500ES 试剂盒得到的 cDNA 保存条件如下：（1）一链/二链合成后，可在-20℃保存≤48 h；（2）若进行 mRNA 94℃片段化处理，需在片段化后立即将体系降温至 4℃（或使用冰浴），以避免 Frag/Primer Buffer 在较高温度下持续作用影响片段化效果。
本产品（货号12500ES）适用于以下样本：（1）起始模板量为0.1-4 μg（体积≤50 μL）的高质量真核生物总RNA，包括动物、植物和真菌等来源的总RNA。
12500ES 适用于两种 RNA 建库场景：（1）mRNA 建库；（2）去除核糖体 RNA（rRNA）的建库。
使用核糖体去除试剂盒时，主峰附近出现的小峰可能是建库探针残留。建议通过调整分选比例（如增加或减少分选循环次数）来优化分离效果，以降低此类残留峰的影响。
针对12257产品去除rRNA过程中可能出现的残留问题，建议从以下两方面排查和优化：（1）RNase H Buffer与RNase H酶混合液的稳定性较差，建议在RNase H消化步骤中单独添加酶或现配现用混合液（配置完成后10分钟内使用完毕）；（2）若混匀不彻底可能导致rRNA残留，建议使用振荡器…
RNaseH单酶稳定性良好。经本公司测试，该酶于4℃条件下放置11天，其rRNA去除效果仍保持正常。建议在4℃环境下短期储存（如11天内）以维持酶活性。
12258ES暂不可用于鼠的样本。该产品（一步法）目前仅适用于人的样本。若需处理鼠等样本，建议选用12257ES或12266ES等其他对应产品。
磁珠推荐选择货号12601ES。接头推荐使用双端短接头，如Cat#12414ES-12415ES，该接头支持双端 384 index标记，适用于各酶切法、机械法建库以及转录组建库等需求。建议根据样本量、测序平台选择，可参考《接头产品选购指南》。
mRNA文库构建中，链特异性文库与常规文库的核心区别在于第二条链合成时所使用的核苷酸类型：（1）常规mRNA文库：在合成第二条链时加入dTTP,（脱氧胸苷三磷酸）；（2）链特异性 mRNA文库：在合成第二条链时加入dUTP（脱氧尿苷三磷酸）。通过此差异，链特异性文库可在文库构建过程中保留RNA的原始…
本产品适用于以下应用：（1）基因表达分析；（2）单核苷酸变异检测；（3）基因融合鉴定；（4）剪切变异体分析。
12300ES适用于起始模板量为 0.1-4 μg（体积≤50 μL）的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总 RNA。