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应用案例基于MGISP-960自动化平台的拟南芥叶片RNA文库构建方法

📂 NGS测序类型 ID 5002

👁 364 次浏览 🗓 2026-10-09 源站内容 ID：2084533694097932288

拟南芥是植物分子生物学研究的模式物种，其叶片转录组测序是解析植物生长发育、逆境响应机制的核心技术，而高质量RNA文库是测序精准度的关键。传统人工建库操作繁琐、通量有限，易引入人为误差，影响实验重复性。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，结合配套RNA建库试剂，优化拟南芥叶片RNA文库构建流程。该方法可实现96样本批量自动化处理，有效规避人工操

来源：翌圣生物｜原文：https://www.yeasen.com/solutiondetail/2084533694097932288 ↗

目的：建立适用于水稻叶片的全基因组重测序自动化建库流程

平台：MGISP-960（华大智造）

样本类型：拟南芥叶片

下游应用：分子标记与育种参考、差异基因功能解析、基因调控机制研究等

建库试剂盒：Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit (dNTP) RNA建库试剂盒

货号：12341ES

文库类型：华大

自动化简版流程

流程分类	流程（其他设置默认按12341说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载）
1 目标RNA富集和片段化	① 加入样本，样本投入量：1000 ng （人工）； ② 将样本加入mRNA 磁珠中，进行捕获反应； ③ 清洗磁珠2次，用tris buffer洗脱mRNA； ④ 加入结合液，mRNA再次结合磁珠； ⑤ 清洗磁珠1次，用frag/primer buffer重悬磁珠，进行片段化，片段程序选择94℃-5min。
2 一链cDNA合成	在片段化产物中加入一链试剂，进行一链程序孵育。
3 二链cDNA合成	在一链产物中加入二链试剂，进行二链程序孵育。
4 接头连接	提前将接头从10 μM稀释到5 μM（人工），加入二链产物和连接试剂，进行连接程序孵育。
5 连接产物纯化和分选	① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.6×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.17x。
6 文库扩增	将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择12 cc。
7 扩增产物纯化	对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。
8 建库结束	建库结束，弹窗提醒人工取走文库。

案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）

类型	文库体积	文库浓度（ng/μL)
拟南芥叶片A	25	28.54
拟南芥叶片B	25	21.58
拟南芥叶片C	25	37.38

片段大小图（检测仪器：Qsep）

结论：文库浓度均在20-40 ng/μL之间，片段大小在400 bp左右，满足后续上机测序需求。

相关核心产品目录

应用	产品货号	产品名称
RNA建库	12341ES	Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit (dNTP) RNA建库试剂盒
接头	13350ES	Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1）
纯化磁珠	12601ES	Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠
自动化耗材	83560ES	0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款）
	83672ES	96孔深孔板，U底（1.3 mL)
	83130ES	250 μL盒装滤芯透明无菌吸头
	83624ES	荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板
文库浓度测定	12642ES	1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂
	83509ES	Qubit专用检测管
	80571ES	核酸定量仪荧光计Qubit（单通道）
文库条带大小检测	10516ES	GoldBand 100 bp plus DNA Ladder
	10202ES	YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液）
	10208ES	Agarose琼脂糖
	60161ES	1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L

来源与原文

来源： 翌圣生物

原文链接： https://www.yeasen.com/solutiondetail/2084533694097932288

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