Case Studies基于MGISP-960自动化平台的拟南芥叶片RNA文库构建方法
拟南芥是植物分子生物学研究的模式物种，其叶片转录组测序是解析植物生长发育、逆境响应机制的核心技术，而高质量RNA文库是测序精准度的关键。传统人工建库操作繁琐、通量有限，易引入人为误差，影响实验重复性。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，结合配套RNA建库试剂，优化拟南芥叶片RNA文库构建流程。该方法可实现96样本批量自动化处理，有效规避人工操
拟南芥是植物分子生物学研究的模式物种，其叶片转录组测序是解析植物生长发育、逆境响应机制的核心技术，而高质量RNA文库是测序精准度的关键。传统人工建库操作繁琐、通量有限，易引入人为误差，影响实验重复性。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，结合配套RNA建库试剂，优化拟南芥叶片RNA文库构建流程。该方法可实现96样本批量自动化处理，有效规避人工操作误差，提升文库质量稳定性与实验效率，可为拟南芥大规模转录组学研究提供标准化、高效的建库技术支撑。
目的：建立适用于水稻叶片的全基因组重测序自动化建库流程
平台：MGISP-960（华大智造）
样本类型：拟南芥叶片
下游应用：分子标记与育种参考、差异基因功能解析、基因调控机制研究等
建库试剂盒：Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit (dNTP) RNA建库试剂盒
货号：12341ES
文库类型：华大
自动化简版流程
流程分类 | 流程（其他设置默认按12341说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
1 目标RNA富集和片段化 | ① 加入样本，样本投入量：1000 ng （人工）； ② 将样本加入mRNA 磁珠中，进行捕获反应； ③ 清洗磁珠2次，用tris buffer洗脱mRNA； ④ 加入结合液，mRNA再次结合磁珠； ⑤ 清洗磁珠1次，用frag/primer buffer重悬磁珠，进行片段化，片段程序选择94℃-5min。 |
2 一链cDNA合成 | 在片段化产物中加入一链试剂，进行一链程序孵育。 |
3 二链cDNA合成 | 在一链产物中加入二链试剂，进行二链程序孵育。 |
4 接头连接 | 提前将接头从10 μM稀释到5 μM（人工），加入二链产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
5 连接产物纯化和分选 | ① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.6×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.17x。 |
6 文库扩增 | 将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择12 cc。 |
7 扩增产物纯化 | 对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
8 建库结束 | 建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）
类型 | 文库体积 | 文库浓度（ng/μL) |
拟南芥叶片A | 25 | 28.54 |
拟南芥叶片B | 25 | 21.58 |
拟南芥叶片C | 25 | 37.38 |
片段大小图（检测仪器：Qsep）
结论：文库浓度均在20-40 ng/μL之间，片段大小在400 bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
应用 | 产品货号 | 产品名称 |
RNA建库 | Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit (dNTP) RNA建库试剂盒 | |
接头 | Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
自动化耗材 | 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） | |
96孔深孔板，U底（1.3 mL) | ||
250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 | ||
荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 | ||
文库浓度测定 | 1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 | |
Qubit专用检测管 | ||
核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） | ||
文库条带大小检测 | GoldBand 100 bp plus DNA Ladder | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | ||
Agarose琼脂糖 | ||
1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |
Not listed yet IMG Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Ki...
Not listed yet IMG Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior...
Not listed yet IMG 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款）
Not listed yet IMG 荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板
Not listed yet IMG Qubit专用检测管
Not listed yet IMG GoldBand 100 bp plus DNA Ladder
Not listed yet IMG Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library ...
Not listed yet IMG Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library ...
Not listed yet IMG Hieff NGS® C37P3 ds-cDNA Synthesis Kit(g...
Not listed yet IMG Hieff NGS® ds-cDNA Synthesis Kit（RNA逆转录和...
Not listed yet IMG Hieff NGS® Small RNA Library Prep Kit fo...
Not listed yet IMG Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit（d...
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