应用方向Nanobody-Tn5，赋予CUT&Tag不一样的体验
一份样本，两种靶标，节省样本，节省时间
2022年12月，Gonçalo Castelo-Branco课题组和美国纽约基因组中心Ivan Raimondi团队同期在Nature Biotechnology上发表了关于nanobody-Tn5的文章。
Nanobody-Tn5主要是将纳米抗体与Tn5转座酶进行融合，制备出可结合两种不同物种（小鼠和兔）一抗的anti-mouse Tn5和anti-rabbit Tn5。这两种nanobody-Tn5中包埋了含不同index的接头序列，Tn5切割染色质时，接头插入到染色质中，通过不同的index来区分来源于mouse的一抗靶向区域还是来源于rabbit一抗靶向的区域。关于这两篇文章，Nature Biotechnology杂志也给出了回应：这两篇论文的主要创新是在检测中使用纳米抗体，可以测量单个细胞中两种或更多组蛋白修饰的全基因组存在，以及细胞表面蛋白表达(NTT-seq)或染色质可及性(Nano-CT)。这种方法使我们能够在更高的水平上以高灵敏度和准确性观察复杂的单个细胞表观基因组研究。
关于这个利用nanobody-Tn5（anti-rabbit tn5和anti-mouse tn5）组成的Multi-CUT&Tag标准化试剂盒的性能大家也很期待吧，来，我们上一波数据吧！
图.H3K4me1使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
将H3K4me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：
图：H3K4me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27me3、H3K4me1、H3K9me3、H3K9ac）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
将H3K9me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：
图.H3K9me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
将H3K27ac使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：
图.H3K27ac使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27me3、H3K4me1、H3K9me3、H3K9ac）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
将H3K27me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：
图.H3K27me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K27ac、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
将H3K9ac使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：
图.H3K9ac使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图
使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。
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Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® CUT&Tag 建库试剂盒 | 12598ES12/48 | 12 T/ 48 T |
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