TechniquesNovel T4 DNA Ligase，让片段连接更高效

——高效，快速，自连低

DNA 连接酶是一种能够催化相邻DNA 的3’-OH 和5’- 磷酸基末段形成磷酸二酯键，并且把两段DNA 拼接起来的核酸酶。T4 Ligase是目前应用比较多的病毒基因组编码的DNA 连接酶，主要从缺失型嗜菌体中提取，噬菌体T4 的30 基因是该酶的合成基因。T4 DNA连接酶在分子生物学中有广泛的应用。

在普通T4 DNA连接酶的基础上，利用定向改造技术，将T4 DNA ligase的有效催化活性结构域通过多轮突变筛选，得到一种连接活性更强的突变体。采用高纯度的生产标准和严格的质量检测，有效去除核酸酶、切口酶的残留，连接时间只需15min，打造一款快速高效的DNA连接酶。

◎ 应用更广泛：可催化粘性末端和平末端形成磷酸二脂键

◎ 连接更高效：建库自连率更低，表现为更好的文库多样性

◎ 适用于多种样本：包括FFPE、cfDNA等在内的所有样本均能高效连接

◎ 适用于多种类型片段连接：兼容illumina平台Y型接头以及MGI平台Bubble接头片段

◎ 严格质控：严格的批次性能与稳定性质控

将本产品用于NGS建库接头连接模块，样本为模式样本cfDNA模拟品，加入Y型建库接头，连接之后经Agilent 2100检测，理论上会出现三个峰：

◎双端均未连接接头片段；
◎仅一端连接接头片段；
◎双端均连接接头片段

而在二代测序文库构建中，只有双端都连接接头的片段才是合格可用的文库，因而通常可以通过双端均连接接头的片段占比反应接头连接效率。即双端连接接头片段占比越高，单端连接以及无接头连接的片段占比越低，连接效率越高。

*样本制备：使用170 bp多重PCR产物作为cfDNA模拟品，该PCR产物经过设计，3’端含有所有碱基的组合（共16种）。

建库试剂盒中搭配不同的连接酶筛选测试（其他组分一致），测序结果显示翌圣Novel DNA Ligase自连率更低。