Techniques动植物多样本直扩PCR(直接PCR)

PCR-based Genotyping等实验，常需纯化样本基因组。当待测样本较多时，纯化基因组的过程费时、操作重复，并且实验成本高。翌圣生物通过改造Taq DNA聚合酶，优化PCR反应体系开发出无需基因组纯化的Direct PCR Kit系列产品。

翌圣Direct PCR Kit是直接从样本开始，以未经基因组纯化的微量原始样本（图1-A）或其裂解产物（图1-B）作为模板，进行PCR-based Genotyping（见图1）。与常规PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit样本用量少，操作简单，实验成本低，可高通量化样本检测。

图1.Direct PCR技术

A. 直接法：取少量样本直接加入到PCR Master Mix中，进行PCR鉴定。

B. 裂解法：样本取样后，加入裂解液中，裂解释放基因组，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，进行PCR鉴定。

★直接：无需进行费时而昂贵的DNA纯化

★快速：10min完成模板制备，最少50min完成PCR反应

★简便：样品无需剪碎或研磨即可完成裂解;PCR Mix为预混液形式，减少加样步骤

★节省：材料用量少

★高通量：可在96孔板中完成裂解反应

本系列产品运用独特的蛋白酶裂解体系，裂解样品，裂解液可直接作为模板，搭配试剂盒中的PCR Master Mix进行基因扩增。

图2.动物、小鼠组织直扩PCR实验过程

图3.植物组织直扩PCR实验过程

改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保证：超强的抑制物耐受性

对于非纯化样本作为模板时，会引入很多对PCR反应有抑制的成分。以普通的PCR反应体系和Taq DNA聚合酶较难得到理想的结果，甚至无法进行PCR扩增。本系列试剂盒中PCR Mix为配方优化预混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加与模板DNA结合能力，对于常见PCR抑制剂具有更高的耐受性，因此具有更广泛的模板适应性。

图4.直扩PCR Kit中的PCR Mix具有更高的杂质耐受度。

相同模板量，用不同的PCR Mix进行PCR，同时在体系中加入不同浓度的各种PCR反应抑制物。比较不同条件下的PCR产物量。

一、多动物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit

★快速：操作时间短

图5.翌圣动物组织直扩PCR试剂盒更加节省时间。

★实验例：基因敲除小鼠基因型鉴定

图6.动物组织直扩PCR试剂盒检测基因敲除动物组织直扩结果。

M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解产物为模板。+：以50ng纯化基因组DNA为模板。﹣：以去离子水为模板。循环数：35个循环。

单条带（580bp）：敲除动物纯合子基因组。单条带（180bp）：野生型基因组。两条带（580bp/180bp）：敲除动物杂合子基因组。

二、啮齿类专用型：Mouse Tissue Direct PCR Kit

★更快速：基因释放充分

图7.小鼠组织直扩PCR试剂盒不同裂解时间直扩结果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数：35个循环。

★更彻底：基因释放充分

1、优于常规碱裂解方法

图8.鼠尾经不同裂解方式处理后的直扩结果。

检测基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常规碱裂解方式处理裂解产物为模板。

3-4：以小鼠组织直扩PCR试剂盒裂解产物为模板。+：以50 ng纯化基因组DNA为模板。﹣：以去离子水为模板。循环数：35个循环。

2、媲美同类产品

图9.鼠尾经不同品牌同类产品裂解处理后的直扩结果。

检测基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng纯化基因组DNA为模板。循环数：35个循环。

三、植物类专用型：Plant Tissue Direct PCR Kit

多类型植物样本验证

图10.不同类型植物叶片直扩结果。

M：100 bp DNA ladder。C：相应植物纯化基因组DNA为模板。1-2：叶片组织裂解产物为模板。循环数：30个循环。

★小鼠基因型鉴定

图11.北京基石生命科技有限公司用户使用鼠尾直扩PCR试剂盒进行小鼠基因型鉴定结果

★水稻基因直扩

图12.华中农业大学用户使用植物直扩PCR试剂盒扩增水稻相关基因