类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性炎症性关节疾病，表现为持续性滑膜炎、全身性炎症，伴有骨骼和软骨侵蚀，最终可导致关节强直和畸形。类风湿关节炎动物模型被广泛用于发病机制和治疗方法的研究。目前已经建立多种动物模型用于研究RA的病因、发病机制、影响因素以及新的治疗靶点的研究和新疗法的评估。

RA动物模型大致可分为诱导型和转基因型两大类，常见的诱导模型有胶原诱导关节炎（CIA）和佐剂诱导的关节炎（AA），转基因小鼠模型有人TNF-α转基因模型等。

弗氏佐剂(Freunds Adjuvant)由Jules Freund在20世纪40年代发明，它是将抗原水溶液与油剂等量混合，再加乳化剂制成油包水的抗原乳剂，是目前动物实验中最常用的佐剂。

弗氏佐剂分为含结核杆菌的弗氏完全佐剂(Complete Freund's Adjuvant, CFA)和不含结核杆菌的弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund's Adjuvant, IFA)，主要用来诱导小鼠胶原诱导的关节炎CIA模型和佐剂诱导的关节炎AA模型。

（1）小鼠模型

胶原诱导性CIA模型是最广泛使用的 RA 小鼠模型之一。用异源的Ⅱ型胶原免疫动物，可以诱导机体产生针对关节软骨Ⅱ型胶原的自身免疫反应，临床表现为多发性末梢关节炎。

造模方法：将牛二型胶原（CⅡ）溶于冰乙酸中，在4℃下搅拌至充分溶解并置4℃冰箱过夜，再将灭活的卡介苗（BCG），即已灭活的结核杆菌，置于液体石蜡中，配制成完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA），将二者等体积混合、乳化，制备成为Ⅱ型胶原乳剂。将该乳剂注射于小鼠尾根部皮内0.1-0.2 mL，使小鼠引发炎症，在注射后的第21日再于小鼠的腹腔中注射0.1-0.2 mL的Ⅱ型胶原乳剂作为激发注射。首次免疫注射后，小鼠会出现局部的炎症刺激反应，1周左右就会愈合；而致炎后的24天小鼠会出现关节肿胀，从后足发展到前足再到尾部。

（2）大鼠模型

造模方法：将牛二型胶原（CⅡ）与不完全弗氏佐剂（Freund incomplete adjuvant，IFA）等量混匀乳化；第一天于大鼠多部位皮内免疫注射，1周后腹腔注射加强免，二次免疫3-7天内即可得到模型。在致敏7天后，踝关节会轻度肿胀和皮肤发红，3周后症状加重，甚至皮肤发生溃疡；5-6周后病理改变进一步加重，关节软骨及软骨下骨质均受血管翳的侵蚀和破坏。

AA 模型是最广泛使用的大鼠 RA 模型，有不完全弗氏佐剂（Freund incomplete adjuvant,IFA）和完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）两种类型。

造模方法：于大鼠皮内注射致炎，模型一般于致炎后10-20天出现续发炎性症状，约在20天达到高峰。炎症表现以踝关节为重，可侵及足垫和全足。关节肿胀症状与临床RA患者具有相似性，但会出现免疫功能紊乱现象。

1) 将牛二型胶原（CⅡ）溶于冰乙酸溶液中，浓度2 mg/mL，4℃过夜；

2) 弗氏不完全佐剂补加已灭活的结核杆菌，使其浓度达2-5 mg/mL，翌圣生物提供的60718ES弗氏完全佐剂中结核杆菌浓度小于10 mg/mL；

3) 将牛二型胶原（CⅡ）乙酸溶液与弗氏完全佐剂等量混合并乳化；

4）每只实验小鼠背部取4-6点进行皮下注射，总共0.1-0.2 mL；

5）3周后用弗氏不完全佐剂，与牛二型胶原（CⅡ）乙酸溶液等量混合并乳化，每只小鼠尾根部取3-5点皮下注射，总共0.1-0.2 mL。

1）准备相关试剂，注意设置实验组与对照组；

2）观察记录：一般在第二次免疫后7-12天小鼠80%以上出现关节炎症状。根据小鼠关节部位红肿及活动程度进行临床症状分级，在实验前和实验后的第3，5，7，12天分别观察记录，等级区分参考如下：

3）小鼠测定：采用小鼠爪足体积测量计测定实验前后小鼠后肢关节体积，测量每只小鼠后腿膝关节约5 mm以下体积，反复三次，记录取平均值，体积大小与关节红肿程度成正比，每三天检测一次；

4）病理检查：取实验组和对照组小鼠，去外皮，4%甲醛固定48 h以上，5%硝酸脱钙2 h，二甲苯浸润，石蜡包埋。制成6 mm切片，HE染色，常规光学显微镜观察，制定评分标准进行病理学诊断。

图3.不同时间点各组大鼠膝关节滑膜和踝关节HE染色结果比较图

综上图片说明，IFA+CII组病理变化特点和 CFA+CII组一样明显，但CFA+CII组病理变化更加严重和明显。