Buying GuidesRAW264.7细胞 M1/M2 巨噬细胞极化诱导试剂盒,标准化配比无需摸索
巨噬细胞小鼠RAW264.7是小鼠腹腔单核巨噬永生化细胞系,通过 Abelson 鼠白血病病毒(A-MuLV)感染小鼠原代腹腔单核巨噬细胞构建,可无限传代、稳定增殖,是全球免疫领域使用最广泛的体外巨噬细胞模型。区别于原代骨髓 BMDM、肺泡 MH-S、腹腔原代巨噬,无需小鼠取材、不用诱导分化,复苏后直接培养即可获得成熟巨噬细胞,实验门槛低、重复性稳定。图1.
小鼠RAW264.7是小鼠腹腔单核巨噬永生化细胞系,通过 Abelson 鼠白血病病毒(A-MuLV)感染小鼠原代腹腔单核巨噬细胞构建,可无限传代、稳定增殖,是全球免疫领域使用最广泛的体外巨噬细胞模型。区别于原代骨髓 BMDM、肺泡 MH-S、腹腔原代巨噬,无需小鼠取材、不用诱导分化,复苏后直接培养即可获得成熟巨噬细胞,实验门槛低、重复性稳定。

图1.M1和M2型巨噬细胞的区别[1]
1. 无需小鼠解剖、不用 7 天诱导分化,省时省力,适合大批量筛选实验;
2. 对 LPS、各类重组细胞因子响应灵敏,M1/M2 分型差异明显,qPCR、流式结果区分度高;
3. 文献引用量最高,数据认可度高,适配硕博课题、SCI 文章、国自然基础实验;
4. 培养成本低、传代稳定,适合长期梯度摸索、重复验证实验。
1. 巨噬细胞 M1/M2 极化机制研究,细胞因子、小分子、天然产物调控筛选;
2. 天然免疫通路:NF-κB、NLRP3 炎症小体、TLR 信号体外模型;
3. 炎症疾病模型:脓毒症、代谢炎症、急性脏器损伤体外评价;
4. 肿瘤免疫:构建 TAM 肿瘤相关巨噬细胞模型,免疫检查点、抗肿瘤药物药效筛选;
5. 吞噬实验、纳米材料生物安全性、胞内微生物感染免疫研究;
6. 配套小鼠巨噬极化细胞因子套装标准验证细胞模型。

M1型促炎极化系统(经典活化): IFN-γ + LPS, 定向诱导M1巨噬,高表达促炎因子,用于急性炎症、抗感染、抗肿瘤免疫研究。
M2型抗炎修复极化系统(替代活化): IL-4 (可加IL13或者IL10) ,高效诱导M2巨噬,主打炎症抑制、组织修复、纤维化、肿瘤微环境方向研究。
完全匹配通用 RAW264.7 极化最优工作浓度:
M1:LPS 100 ng/mL + mIFN-γ 20 ng/mL,刺激 24 h
M2:mIL-4 20 ng/mL(可加IL13或者IL-10),刺激24h 开箱复溶直接使用,省去梯度摸索、分装配比,大幅缩短实验周期。
全部重组蛋白采用原核高表达工艺,Tag-Free 天然活性片段; 细胞活性验证合格,RAW264.7 诱导后 M1/M2 分型清晰,标志物诱导倍数高,qPCR、流式、WB 数据区分度强; M1 iNOS、TNF-α、CD86 显著上调;M2 Arg1、Ym1、CD206 稳定高表达,极化阳性率可达 85% 以上。
所有组分严格放行:内毒素<0.1 EU/μg,无杂蛋白残留; 避免普通细胞因子批次波动、本底炎症偏高导致实验重复性差,适合国自然、SCI、硕博课题长期重复验证。
各因子独立无菌冻干粉末; 复溶后按需分装冻存,有效保护细胞因子生物活性,减少浪费、降低实验成本。
附赠完整标准化操作方案、标志物鉴定参考、流式抗体搭配建议。
1.接种:6孔细胞培养板(84011ES),每孔2×105个细胞(细胞不宜过多,否则影响极化效果),37°C,5% CO₂培养24h,让其充分贴壁。
2.M1型诱导:将培养基更换为DMEM(41401ES)+2%FBS(40132ES)(减少血清中细胞因子的影响),并加入重组小鼠IFN-γ(25 ng/mL)和LPS(100 ng/mL),设置对照(仅细胞,不加诱导剂),37°C,5% CO₂培养24h。
3.流式检测流程:
①收集细胞:细胞因子干预24h后,弃培养基上清,用PBS清洗细胞1遍,弃上清,再将贴壁细胞用PBS轻轻吹 打重悬,离心收集细胞。
②计数:用0.5ml的1%BSA重悬细胞,计算细胞总数,观察细胞活率,活率需达到95%以上。
③孵育抗体:加入PE Rat anti-Mouse CD86 mAb(抗体用量参考说明书)或者同型对照,室温孵育30min 。
④洗涤细胞:用PBS洗涤细胞,去除残留的抗体,并再次用PBS重悬。
⑤死活染料染色:每孔加入 Fixable Viability Kit (用量参考说明书),室温避光孵育15min。
⑥洗涤细胞:用1%BSA洗涤细胞,去除残留的抗体,用1%BSA重悬细胞。
⑦上机检测。
1.接种:6孔细胞培养板,每孔2×105个细胞(细胞不宜过多,否则影响极化效果),37°C,5% CO₂培养24h,让其充分贴壁。
2.M2型诱导:将培养基更换为DMEM+2%FBS(减少血清中细胞因子的影响),并加入重组小鼠IL-4(20ng/mL),设置对照(仅细胞,不加诱导剂),37°C,5% CO₂培养24h。
3.流式检测流程
①收集细胞:细胞因子干预24h后,弃培养基上清,用PBS清洗细胞1遍,弃上清,再将贴壁细胞用PBS轻轻吹 打重悬;离心收集细胞。
②计数:用0.5ml的1%BSA重悬细胞,计算细胞总数,观察细胞活力,需达到95%以上。
③死活染料染色:离心后用PBS重悬细胞至细胞密度为1*10^7/ml,100 μl/孔加至96孔板或流式管中,并加入Fixable Viability Kit(用量参考说明书),室温避光孵育15min,300Xg 离心5min,弃上清。
④固定:细胞用0.2mL 4%多聚甲醛重悬固定,室温避光放置15min,300Xg 离心5min,弃上清(去除残留的固定液)。
⑤破膜:细胞用0.2ml 1X破膜剂重悬破膜,室温避光放置30min,400Xg 离心5min,弃上清。
⑥洗涤细胞:每孔加入0.2ml 1X破膜剂重悬细胞,400Xg 离心5min,弃上清;
⑦封闭:每孔加入0.1ml 1X破膜剂,并加入2μg CD16/CD32 (771585ES60 )抗体进行封闭,冰上放置30min,400Xg 离心5min,弃上清。
⑧孵育抗体:每孔加入0.1ml 1X破膜剂,并加入APC anti-Mouse CD206 mAb (抗体用量参考说明书)或者同型对照APC Rat IgG Isotype Ctrl Antibody,室温孵育 30min,400Xg 离心5min,弃上清(去除残留的抗体)。
⑨洗涤细胞:每孔加入0.2ml 1%BSA洗涤细胞,400Xg 离心5min,弃上清,重复洗涤2次,用200μl 1%BSA
重悬细胞。
⑩上机检测。

图2. 流式分析数据(数据来源于重庆医科大学)
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 |
细胞因子类 | Mouse RAW264.7 Cell Polarization Induction Set 小鼠RAW264.7细胞诱导极化试剂盒 | |
细胞培养类 | DMEM High Glucose Medium DMEM高糖培养基(含L-谷氨酰胺,丙酮酸钠110 mg/L;不含HEPES,双抗) | |
1× PBS 细胞培养级 | ||
Red Blood Cell Lysis Buffer 红细胞裂解液 | ||
Fetal Bovine Serum Gold Pro 胎牛血清(特级) |
*相关文献
1.Ernestina A , Marcarious M T , Rui Z , et al.Exploring the polarization of M1 and M2 macrophages in the context of skin diseases.Mol Biol Rep. 2024 Feb 1;51(1):269.
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