技术讲解低成本、高效率！T7核酸外切酶I(T7 Endonuclease I)让基因编辑检测更经济

随着基因编辑技术的飞速发展，CRISPR-Cas9、TALEN、ZFN等工具已成为生命科学领域的核心利器。然而，基因编辑的成功与否，关键在于编辑效率的准确评估。如何快速、高效地检测基因编辑的效率，成为了科研人员面临的重要挑战。传统的检测方法如测序等虽然准确，但耗时长、成本高，难以满足高通量筛选的需求。因此，开发一种快速、简便的检测方法成为了当务之急。在这一背景下，T7核酸内切酶 I（T7 Endonuclease I）凭借其高灵敏度、快速反应和操作简便的特点，成为评估CRISPR-Cas9等基因编辑工具效率的理想选择。

T7 Endonuclease I是一种来源于T7噬菌体的核酸酶，能够识别并切割不完全配对的DNA、十字形结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA，也能以较慢速度切割带切刻的双链DNA，切割位点位于错配碱基5´端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其应用于基因编辑效率检测的作用机制如下：当基因编辑后，目标位点会形成含有错配碱基的DNA双链（如插入、缺失或点突变），T7 Endonuclease I能够识别这些错配位点，并在其附近进行切割，产生特定长度的DNA片段。

图1.T7 Endonuclease I结构及作用过程示意图^[1]

使用翌圣和来自进口Supplier A*的T7 Endonuclease I分别与含有错配碱基的dsDNA底物进行孵育，并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明，翌圣20 U的T7 Endonuclease I能有效切割200 ng含有错配碱基的dsDNA，且切割效果媲美来自进口Supplier A*的T7 Endonuclease I。

图2.T7 Endonuclease I切割效果验证（注：底物投入量-200ng）

参考文献

[1] Déclais A C, Hadden J, Phillips S E V, et al. The active site of the junction-resolving enzyme T7 endonuclease I[J]. Journal of molecular biology, 2001, 307(4): 1145-1158.

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