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Q:为什么柱子反压过高?
A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用 0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤,或离心去除。
Q:填料可以使用多少次?
A:由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。
Q:为什么洗脱组分中无目的蛋白?
A:可能是融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力;建议更换载体。
Q:为什么洗脱样品较杂?
A:可能是平衡/洗杂不充分;建议加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA 等。
Published citations
[1] Xu C, Ye P, Wu Q, et al. Identification and functional characterization of three iridoid synthases in Gardenia jasminoides. Planta. 2022;255(3):58. Published 2022 Feb 3. doi:10.1007/s00425-022-03824-3(IF:4.116)
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