若针对抗体亲和性及酶活性检测,可不经纯化直接用于测试;若实验对蛋白纯度有明确要求,或需开展细胞水平实验,则需参照常规蛋白表达产物的纯化流程进行后续处理。
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不带,我们的质粒做双酶切的时候会把质粒上的his标签序列切掉,如果需要目的蛋白带标签,需在目的基因上加上所需的标签序列。
线性模板上已预置His标签编码序列,最终表达的目的蛋白会携带His标签,无需在目的基因上额外添加标签序列。
可以。若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
可以。直接在磁珠中加loading煮球离心取上清跑胶即可
一般磁珠的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为:20ul磁珠混悬液+5ug抗体+总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育
参照下表蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表
不建议重复使用。
可能是样品或buffer 中有气泡;建议样品和 buffer 进行脱气。
可能是柱子太脏,载量降低;建议清洗树脂。
一般填料的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为:20ul填料+5ug抗体与总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。
用于偶连抗体进行蛋白的IP和coip不建议重复使用。
答:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。
答:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。
本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。
工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。