核酸提取与纯化FAQ

样本反复冻融或提取过程中存在RNase污染。

可能是初始样本投入量过多，应减少起始投入量；也可在后续实验中挑选带有去除基因组的反转录试剂盒进行去除。

要注意起始细菌的投入量不要太高，可以用 DNase I消化一下过两次柱，或者使用含有gDNA 去除的反转录试剂。

指的是第2步滤过液体积的50%。

试剂盒可同时裂解释放样本中的病毒 DNA 与 RNA，提取得到的产物为 DNA 与 RNA 的混合体系。若仅需要病毒 DNA，可在提取结束后添加 RNase 处理，降解体系内的 RNA 组分，从而得到纯化的 DNA。

客户反馈过的样本有家禽的组织和呼吸道分泌液、鸡胚尿囊液，粪便，棉拭子等。

snRNA 的片段长度通常为 100‑200 nt，而本试剂盒更适用于片段大小十几至三十几 nt 的短核酸片段，因此并不适配 snRNA 的提取。

不同个体样本之间提取的RNA量存在显著差异。提取50-200μL人血清中的RNA含量较低，超出Nanodrop的检测下限，所以无法准确测量。一般后续多采用更灵敏的方法比如荧光法来更准确地定量低浓度的RNA，包括荧光定量PCR。

不是，是把血清或者血浆中总 RNA（包含miRNA）一起提取出来

本身血液中RNA/miRNA含量较低，而nanodrop测定20ng/ul以下就不准了，不建议用紫外测定浓度，直接进行后续的RT-PCR或RT-qPCR分析看实验结果。

Carrier RNA 主要是富集核酸作用，对低浓度样本检出有一定的作用。

多聚糖（糖原）：RNA 在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低，通过高速离心可发生沉淀。当RNA 浓度很低时，微量 RNA 不足以形成沉淀。在上述环境条件下，糖原也不可溶并可与 RNA 共沉淀，形成可视化沉淀。核酸混合物（PolyA 钾盐、大肠杆菌总 RNA、酵母总 RNA、tRNA 等）：减少吸附损失，…

最后获得的含有 Carrier RNA 的痕量核酸可直接用于 PCR 或 RT-PCR 反应。

糖原是不能够被硅胶柱吸附的，而 Carrier RNA 可以，所以柱式法的试剂盒需要配合 Carrier RNA。使用

检测所得浓度主要反映 Carrier RNA 的含量，样本本身的靶 RNA 含量极低，对浓度检测结果几乎无影响，因此各样品浓度数值表现接近。出现扩增条带差异、部分样本无条带的现象，大概率来源于样本本身，推测这几份份样本中目的 RNA 几乎没有或含量过低。

Carrier RNA，中文名载体 RNA，又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节，提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料，管壁上有静电，会吸附核酸。在提取纯化过程中采用 Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应，保证核酸能很好被吸附到纯化柱上，提高洗脱效率，从而达到尽可能多的回收样本中核酸！

大约为 14 个 T 碱基。

样本起始量高或材料裂解不充分，建议采用适量样本并充分研磨或匀浆.

若 OD260/OD280＜1.6：有可能有蛋白质残留，氨基酸残基中的苯环在 280nm 处有吸收从而造成比值偏低，当然也有可能是其他苯环物质（酚类）造成的。可以用蛋白酶 k 进行处理；加入变性剂使蛋白变性。或者用氯仿进行抽提。

脂肪组织提取难度较高，可先对样本进行离心处理后再上柱，但样本投入量不宜过高。脂肪组织研磨处理难度大，过柱易导致提取产物浓度与纯度不理想，因此更推荐采用trizol法提取。