10298ES、10299ES和10301ES均为翌圣生物的DNA连接酶产品,具体区别如下:(1)10298ES:灵敏度更高,尤其适用于cfDNA(循环肿瘤DNA)样本的建库,可有效应对低起始模板量的连接需求;(2)10299ES:酶连接效率高,且宿主大肠杆菌残留低,尤其适合病原检测、NIPT(无创…
建库单酶FAQ
10298、10299产品可用于分子克隆。使用时,可将酶稀释至常规用于克隆的T4 DNA Ligase浓度,再按照产品说明书的操作流程进行。稀释可直接使用产品内提供的buffer
连接反应中,若连接 buffer 未充分混匀,可能导致酶与底物混合不均,进而影响连接效率,最终造成文库产量降低。为确保反应体系混合均匀,建议采用以下操作:(1)将反应管上下颠倒 10 次;(2)或使用漩涡混合仪短暂涡旋 3 秒。
Canace 暂不建议直接用于酵母菌液。若需尝试使用,需对酵母菌进行破壁处理,具体方法包括:(1)通过煮沸处理;(2)进行反复冻融操作;(3)添加蜗牛酶等酶制剂辅助破壁后,再尝试使用 Canace。
Canace 对模板长度的理论验证范围为:简单模板支持 20 kb,复杂模板支持 10 kb。在此范围内,理论上可用于相应长度片段的扩增。但具体扩增效果还与模板质量、引物设计及反应条件等因素相关,建议根据实际实验体系进行优化。
Canace 暂未针对多重PCR进行验证。若需开展多重PCR实验,建议选用Cat#13606ES产品。
Canace 可应用于以下场景:(1)平末端克隆:适用于对平末端 DNA 片段进行连接,构建重组载体;(2)点突变:支持定点突变实验,实现 DNA 序列的精准修饰;(3)高保真性 PCR:在 PCR 扩增过程中保持高保真度,确保扩增产物序列的准确性。
a)Canace 具有保真性的原理是其具备 3’-5’核酸外切酶活性,可对新合成的 DNA 链进行校正,从而降低突变率。b)关于错配率:Taq 酶的错配率约为 2×10⁻⁴(即 0.0002),意味着在扩增约 5kb 片段时,大约会有 1 个碱基发生突变;而 Canace 的错配率约为 0.0003…
Canace 高保真酶目前暂不具备热启动特性。如需热启动高保真酶产品可以选择Cat#10153ES。
Canace 扩增产物是平末端。原因是 Canace 高保真酶具备 3’-5’核酸外切酶活性,会将扩增产物 3’端的 A 进行切除,从而使产物末端呈现平末端特征。
若使用Canace扩增后获得平末端产物,需加A尾时,可按以下步骤操作:(1)首先对平末端PCR产物进行纯化,要求产物浓度至少为20ng/μL(可通过琼脂糖凝胶电泳观察条带清晰度及亮度判断,或通过Nanodrop和Qubit定量)。(2)取14.5μL PCR产物,加入2μL Taq Buffer、3…
关于其他品牌高保真酶产品能否用Canace替代,需根据具体酶的特性及实验需求综合判断。本公司的Canace系列高保真酶在序列保真度、扩增效率等核心性能上具有优势,可替代部分品牌的高保真酶产品。但不同品牌酶在具体参数(如最佳反应温度、Mg²⁺浓度、扩增片段长度上限等)上可能存在差异,建议在使用前参考产…